德泰生物高保真PCR预混液(2×PCR Master Mix)为2×浓度的PCR混合液,其除了含有PCR扩增常用的dNTP和Mg2+之外,还含有一种基于基因工程改造的新一代高保真酶,其具有极高的扩增效率和高保真性,同时增加的特殊扩增促进剂也使扩增效果进一步增加。此酶具有5’→3’DNA聚合酶活性以及3’→5’外切酶活性,扩增产物为平末端,可用于后续同源重组等试验。
本品适用于以基因组DNA、cDNA、质粒等模板的PCR反应
组分 | 体积/μL |
---|---|
ddH2O | Up to 50 |
2× PCR Master Mix | 25 |
模板 | X |
正向引物(10 μM) | 1 |
反向引物(10 μM) | 1 |
注:
1.使用前请于冰上融化,震荡瞬时离心。
2.模板推荐量基因组DNA:50~150ng;质粒:5~50ng;cDNA:1~5μL(不超过反应体积的1/10)。
程序 | 温度/℃ | 时间 | 循环数 |
---|---|---|---|
预变性 | 95 | 3 min | 1 |
变性 | 95 | 15 s | 35 |
退火a | 根据引物而定 | 15 s | |
延伸b | 72 | 15 s | |
延伸 | 72 | 5 min | 1 |
保存 | 4 | ∞ | 1 |
a.退火温度:一般设置为引物Tm值±3℃左右即可。
b.延伸时间:一般模板设置为15s/kb,对于一些困难模板,可延伸至20~30s/kb范围之间调整。
常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
---|---|---|
无扩增产物或产物量少 | 引物 | 重新设计优化引物 |
退火温度 | 设置梯度,寻找合适退火温度 | |
引物浓度 | 适当提高引物浓度 | |
延伸时间 | 适当提高延伸时间 | |
循环数 | 适当提高循环数 | |
模板 | 适当增加模板量或提高模板纯度 | |
条带弥散或有杂带 | 引物 | 重新设计优化引物或适当降低引物浓度 |
退火温度 | 适当提高退火温度并寻找最适温度 | |
延伸时间 | 根据杂带大小而定,大于目的片段降低,小于目的片段提高延伸时间 | |
循环数 | 适当降低循环数 | |
模板 | 使用纯度高的模板或适当降低模板量 |
澳门威斯人游戏平台[亚洲]全站最新版V11.37.7 Nanjing Detai Bioengineering Co.,Ltd. ©2024 All Rights Reserved
苏ICP备2021019379号-1 | 网站地图 | 用户协议 | 隐私政策