摘要:对哺乳动物细胞转染表达蛋白来说,选择合适的转染方法和转染试剂对转染的成功率起到决定性作用。本文主要列举了瞬时转染和稳定转染的一些方法、原理及适用性,并列举脂质体细胞转染的步骤、注意事项。
细胞转染,是指将外源基因导入细胞内的一种技术。根据哺乳动物细胞蛋白表达流程,细胞培养完成后需进行细胞转染,根据不同的实验目的选择不同的转染方法。目前,常用的细胞转染方法主要分为三类途径:物理介导(电穿孔法,基因枪法、显微注射法)、化学介导(脂质体转染法、磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物介导法)、生物介导(病毒介导转染、原生质体转染)。
理想细胞转染方法,应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。目前实验室常用的转染方法有脂质体转染,阳离子聚合物转染和病毒转染,不同的转染方法各有利弊,针对细胞的习性和不同的实验目的选择相对合适的转染方法。下面列举了一些常用转染方法的原理,优缺点和适用性:
细胞转染方法 | 细胞转染原理 | 主要特点 | |
---|---|---|---|
阳离子脂质体转染法 | 带正电荷的脂质体靠静电作用和DNA结合形成DNA-脂质体复合物,然后通过细胞的内吞作用进入细胞 | a)操作简便 b)适用于各种裸露的DNA和RNA片段 c)适合转染各种的细胞 d)对DNA浓度有一定要求 e)对细胞有一定的毒性 |
瞬时转染 稳定转染 所有细胞 |
阳离子聚合物 | 带正电的阳离子聚合物与核酸的磷酸基团形成带正电的复合物,复合物和带负电的细胞膜接触,并通过内吞作用进入细胞 | 与脂质体转染法类似,但是具有很低的毒性,操作简单,适用性广,是新一代转染试剂 | 瞬时转染 稳定转染 所有细胞 |
磷酸钙法 | 磷酸钙能够促进外源DNA和细胞的结合,磷酸钙-DNA复合物能够附着到细胞表面,并通过内吞作用进入细胞 | a)操作简单 b)对DNA浓度要求高 c)适用性有局限(不适用于原代细胞) |
瞬时转染 稳定转染 |
电穿孔法 | 高脉冲的电压破坏细胞膜,在细胞膜表面形成孔道,DNA通过孔道进入细胞 | a)适用性广,适用于质粒和几十kb的基因组片段 b)针对不同细胞要优化实验条件 c)细胞致死率较高 |
瞬时转染 稳定转染 所有细胞 |
显微注射法 | 利用显微操作系统和显微注射技术将DNA直接注入到细胞中 | a)整合率较高,适用于工程改造和转基因动物的建立 b)操作复杂,且需要昂贵精密的设备 c)外源基因的整合位点和拷贝数无法控制,会导致片段缺失、突变 |
瞬时转染 稳定转染 |
逆转录病毒转染 | 通过病毒的膜蛋白和细胞表面的受体相互作用而进入细胞,利用宿主细胞酶自行转录复制合成DNA,并随机整合到细胞基因组中 | a)转染效率高,适用于难转染细胞转染 b)利用病毒介导转染,外源基因整合较稳定 c)逆转录病毒只选择感染分裂细胞 d)容纳外源基因长度<8kb |
稳定转染 特定细胞转染 |
哺乳动物细胞瞬转
细胞的稳定转染
真核蛋白表达
影响细胞转染效率的因素
澳门威斯人游戏平台[亚洲]全站最新版V11.37.7 Nanjing Detai Bioengineering Co.,Ltd. ©2024 All Rights Reserved
苏ICP备2021019379号-1 | 网站地图 | 用户协议 | 隐私政策